Czerwone białko fluorescencyjne pochodzące z morskiego ukwiału kupionego na przykład w sklepie zoologicznym może pokazać więcej szczegółów w tkankach niż jakiekolwiek inne „świecące“ białka wykorzystywane przez biologów molekularnych - mówią rosyjscy naukowcy, którzy wyizolowali proteinę.

Wszystko zaczęło się od przypadku. Jeden z badaczy pracujących w moskiewskim Instytucie Chemiii Bioorganicznej - Sergey A. Lukyanov, odwiedzając sklep zoologiczny, zauważył, że czerwony ukwiał miał niezwykle instensywną barwę i próbował go kupić sądząc, że będzie on doskonałym kandydatem oferującym nowy rodzaj barwnika. Jednak pracownik sklepu zoologicznego poinformował, że jamochłon został sprzedany i oczekuje obecnie na przyjście kupca. Lukyanov bez wahania przebił ofertę kupca i wyszedł ze sklepu niosąc tryumfalnie w rękach ukwiał.

Barwnik został wyizolowany w laboratorium, a następnie badacze opracowali jego wzmocnioną wersję, którą nazwali TurboRFP (ang. turbo red fluorescent protein). Białko TurboRFP składa się z wielu takich samych podjednostek, dlatego w kolejnym etapie naukowcy dokonali zabiegów, aby otrzymać monomerową wersję - zawierającą tylko jedną podjednostkę o nazwie TagRFP.

Białko TagRFP było jedynie dwa razy jaśniejsze od innej używanej w biologii molekularnej fluorescencyjnej cząsteczki - DsRed2. Aby uzyskać bardziej intensywną barwę w świetle ultrafioletowym, badacze dokonali 100 tys. mutacji w genie TurboRFP wraz z towarzyszącym temu screeningiem białka w głębokiej podczerwieni. W końcu udało się znaleźć wersję genu, która dawało białko o najintensywniejszej barwie i nazwali go Katiuszka - zdrobnieniem imienia Ekaterina na cześć Ekateriny Merzlyak, współpracownicy z laboratorium, która poczyniła największe zasługi przy wyizolowaniu i opracowaniu TurboRFP i TagRFP.

Naukowcy przetestowali białko pod kątem funkcjonalności i ewentualnych efektów ubocznych w żywych kulturach komórkowych, jak również w komórkach mięśni żaby szponiastej (Xenopus laevis). Nowy marker fluorescencyjnyn nie wykazywał żadnych oznak toksyczności, co jest o tyle istotne, że w trakcie badań nie będzie mieć wpływu na wynik eksperymentów.

Nowy barwnik pomoże w poznawaniu mechanizmów wczesnego rozwoju embrionalnego, detekcji transgenów, a także może być stosowany w identyfikacji komórek nowotworowych.

Publikacja dotycząca Katiuszki ukazała się w czasopismie „Nature Methods“.

hlbiotech

źródło: Biocompare.com

———————————
Oryginalna publikacja: Dmitry Shcherbo et al., “Bright far-red fluorescent protein for whole-body imaging”, Nature Methods - 4, 741 - 746 (2007), Published online: 26 August 2007, doi:10.1038/nmeth1083